将小鼠的头靠近针头。将拇指和食指放在眼球的两侧，牢固地握住眼部区域。使用向下的动作，尽可能暴露眼球，同时保持眼球处于静止位置（这需要将拇指和食指紧邻眼球放置，但不要再向下）。将针头从眼睛的前端插入眼球下方的区域（可选：可以注射其针头完全插进去，直到针头感觉到眶后丛后面的骨头并稍微回撤点针头）。将液体注入小鼠。迅速拔出针头，用眼睑轻轻遮住眼睛，防止出血。监测小鼠是否有任何出血或其他不适的迹象，这些迹象一般不会发生。

Anatomy-of-the-retro-orbital-venous-shady-blue-of-the-mouse-and-route-of-injection-A

操作步骤详解：

1.吸入麻醉小鼠

2.根据体重吸取待注射的液体，注意排空气泡，避免因空气栓塞导致小鼠死亡

3.左手固定小鼠，左手大拇指和食指将小鼠固定好，侧卧位(避免压迫气管），微微用力并使眼球突出于眼眶

4.右手持1mL注射器，针头与内眦呈45~60°，于内眦上方2mm、皮缘内1mL处进针，针尖（尖口朝向内侧，以保护眼球不被划伤）与小鼠鼻尖方向呈45°角缓慢刺入内眦，微微用力即会有明显落空感，刺入深度为3~5mm

5.缓慢推注，缓慢退针，轻轻按压眼睛以控制出血

眼眶后静脉注射


注意事项：

1.注射总量：8周左右小鼠20g体重不超过0.15ml~0.4ml，幼鼠则一般不超过0.08ml

2.避免戳到眼眶后部的骨头；插入后不要移动针头以避免血管破裂；不要抽吸避免血管塌陷

3.注射失败的几种情况：小鼠皮下起包；注射液从眼眶中溢出；注射后小鼠口腔内有注射液流出

4.注射成功的情况：快速退针的情况下眼眶内会有血液流出；快速注射时小鼠身体会有抽动

参考文献：

1. Pugach EK,Li P, White R,Zon L. Retro-orbital injection in adult zebrafish . J Vis Exp, 2009,(7):34

2. Nanni C,Pettinato C,Ambrosini V,et al.Retro-orbital injection is an effective route for radiopharmaceutical administration in mice during small-animal PET studies. Nucl Med Commun, 2007. 28(7):547-553

3. Gessler DJ, Tai PWL, Li J, Gao G. Intravenous Infusion of AAV for Widespread Gene Delivery to the Nervous System. Methods Mol Biol. 2019;1950:143-163. doi:10.1007/978-1-4939-9139-6_8

4. Prabhakar S, Lule S, da Hora CC, Breakefield XO, Cheah PS. AAV9 transduction mediated by systemic delivery of vector via retro-orbital injection in newborn, neonatal and juvenile mice. Exp Anim. 2021;70(4):450-458. doi:10.1538/expanim.20-0186